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Title
Isolation of subcellular fractions from tissues and cellular sources / vorgelegt von Nicole Penkoff
Additional Titles
Isolation of subcellular fractions from tissues and cellular sources
AuthorPenkoff, Nicole
CensorMayer Bernhard-Michael
Published2014
Description70 Bl. : Zsfassung (2 Bl.) ; Ill., graph. Darst.
Institutional NoteGraz, Univ., Dipl.-Arb., 2014
Annotation
Abweichender Titel laut Übersetzung der Verfasserin/des Verfassers
Zsfassung in dt. u. engl. Sprache
LanguageEnglish
Document typeThesis (Diplom)
Keywords (GND)Lunge / Leber / Gewebe / Intrazellulärer Transport / Proteine / Enzym / Lunge / Leber / Gewebe / Intrazellulärer Transport / Proteine / Enzym / Online-Publikation
URNurn:nbn:at:at-ubg:1-61617 Persistent Identifier (URN)
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 The work is publicly available
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Isolation of subcellular fractions from tissues and cellular sources [2.38 mb]
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Classification
Abstract (German)

Die Isolierung und Reinigung von subzellulären Strukturen aus Zellen und Geweben ist ein wesentliches biochemisches Verfahren, um die Lokalisierung/den Transport von verschiedenen Proteinen und Enzymen zu untersuchen. Markerenzyme, die sich mehr oder weniger ausschließlich innerhalb eines bestimmten Organells befinden, sind wichtig um subzelluläre Strukturen zu identifizieren und zu beurteilen. Ziel dieser Arbeit war es, subzelluläre Strukturen aus verschiedenen Gewebequellen zu isolieren und dessen Reinheit mit Markerenzymen zu bestimmen. Darüber hinaus wurde die Verteilung der eNOS in Lunge und Leber von WT und ATGL(-/-) ? Mäusen sowie das Expressionsmuster der ALDH2 in Schweinekoronararterien untersucht. Während mittels Differentialzentrifugation isolierte subzelluläre Strukturen aus Homogenaten von Mäuselungen und Schweinekoronararterien relativ rein waren, wiesen jene der Leber eine viel geringere Reinheit auf. Um Organellen höherer Reinheit zu erhalten, wurde z.B. Saccharose-Dichtegradienten-Zentrifugation angewandt. In Lunge und Leber der Maus als auch in Koronararterien zeigen die Ergebnisse eine überwiegende Verteilung der eNOS in Plasmalemma und Mitochondrien. Bei der Untersuchung möglicher Auswirkungen des ATGL-Mangels auf die subzelluläre eNOS Verteilung wurde eine signifikante Verminderung der eNOS Expression in der mitochondrialen Fraktion von Lunge und Leber beobachtet. In Koronararterien wurde die ALDH2 in den Mitochondrien detektiert. Die Tatsache, dass die GAPDH und Na+/K+-ATPase-Expression in ATGL-armen Gewebe reguliert wurde, macht sie für dieses Tiermodell als geeignete Marker ungültig. Außerdem scheint die Na+/K+-ATPase auch in den Mitochondrien von Lunge und Leber der Maus exprimiert zu werden. Zusammenfassend legen diese Daten nahe, dass die richtige Wahl von Markerenzymen, die individuell an das jeweilige Testsystem angepasst werden müssen, die Voraussetzung für gültige Ergebnisse in biochemischen Studien ist.

Abstract (English)

Isolation and purification of subcellular structures from cells and tissues represents an essential biochemical method to study the localization/trafficking of distinct proteins and enzymes. Marker enzymes that are more or less exclusively located within a specific organelle are important tools to identify and judge subcellular structures. The objective of this work was to prepare subcellular structures from different tissue sources and to determine the purity of the organelles using marker enzymes. In addition, the distribution of eNOS in lung and liver of WT and ATGL(-/-) mice as well as the expression pattern of ALDH2 in porcine coronary arteries was investigated. Isolation of subcellular structures from lung homogenates of mice and from porcine vessel homogenates by differential centrifugation yielded relatively pure organelles. In liver, however, subcellular fractions were much less pure. Additional purification e.g. by sucrose density gradient centrifugation were applied to obtain organelles of higher purity. In murine lung and liver as well as in coronary arteries results point to a predominant distribution of eNOS in plasmalemma and mitochondria. Investigating the potential effect of ATGL deficiency on subcellular eNOS distribution, significantly decreased expression was observed in the mitochondrial fraction of murine lung and liver. In coronary arteries ALDH2 was detected in mitochondria. The fact that GAPDH and Na+/K+-ATPase expression was regulated in ATGL- deficient tissues invalidates them as adequate markers for this animal model. In addition, Na+/K+-ATPase appears also to be expressed in mitochondria of murine lung and liver. In summary, these data suggest that the prerequisite for valid results in biochemical studies is the appropriate choice of marker proteins individually adjusted to the test system of interest.

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