Titelaufnahme

Titel
Subcellular localization of sterol O-acyltransferase from Arabidopsis thaliana expressed in Nicotiana tabacum / Lisa Maria Volleritsch
Verfasser/ VerfasserinVolleritsch, Lisa Maria
Begutachter / BegutachterinSchmid, Martin
Erschienen2014
UmfangV, 86 Bl. : Zsfassungen (2 Bl.) ; Ill., graph. Darst.
HochschulschriftGraz, Univ., Dipl.-Arb., 2014
Anmerkung
Zsfassungen in dt. und engl. Sprache
SpracheEnglisch
DokumenttypDiplomarbeit
Schlagwörter (GND)Ackerschmalwand / Sterol-Acyltransferase / Tabak
URNurn:nbn:at:at-ubg:1-106485 Persistent Identifier (URN)
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Subcellular localization of sterol O-acyltransferase from Arabidopsis thaliana expressed in Nicotiana tabacum [6.01 mb]
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Zusammenfassung (Deutsch)

Im Arabidopsis thaliana Genom wurde vor Kurzem ein Gen identifiziert, das für das Enzym Sterol O-Aclytransferase (AtSAT) codiert und welches sowohl mit der Acyl-CoA:Cholesterol Acyltransferase (ACAT) von Tieren, als auch mit den Acyl-CoA:Sterol Acyltransferasen (AREs) von Hefen verwandt ist. Dieses Enzym katalysiert eine Acyl-CoA vermittelte Acetylierung von freien Sterolen und spielt somit eine wichtige Rolle in der Regulation der Sterol Homöostase. Aus dem Grund, dass sowohl das ACAT Enzym von Tieren und die ARE Enzyme von Hefen, als auch die meisten Enzyme des Post-Squalene Synthese Weges, im endolplasmatischen Retikulum lokalisiert sind, haben wir die Vermutung aufgestellt, dass auch die Sterol O-Aclytransferase von Arabidopsis thaliana im ER vorhanden ist. Um diese Hypothese zu beweisen, untersuchten wir mit transformierten Agrobakterien infiltrierte Blätter von Nicotiana tabacum unter dem Fluoreszenz Mikroskop. In die Bakterien wurden zuvor zwei unterschiedliche Vektoren eingeschleust, nämlich der pEarlyGate 101(AtSAT-C-YFP-HA) und pEarlyGate 104(AtSAT-N-YFP) Vektor. Die Agroinfiltration führte schließlich zu einer Expression des AtSAT Proteins, welches entweder am C-Terminus oder N-Terminus an den gelben Fluoreszenzmarker YFP gebunden war. Mit dieser Studie konnten wir beweisen, dass die Sterol O-Acyltransferase von Arabidopsis im endoplasmatischen Retikulum lokalisiert ist, und somit liefern wir einen weiteren Beweis, dass es sich bei diesem Enzym um einen wahrhaften Verwandten von den Acyl-CoA:Sterol Acyltransferasen (ACAT, AREs) in Säugetieren und Hefen handelt.

Zusammenfassung (Englisch)

A gene encoding a novel sterol ester (SE) forming enzyme, namely sterol O-acyltransferase (AtSAT), which is related to the acyl-CoA:cholesterol acyltransferase (ACAT) in animals and to acyl-CoA:sterol acyltransferases (AREs) in yeast systems, has recently been identified in the Arabidopsis thaliana genome. AtSAT catalyses an acyl-CoA dependent acylation of free sterols, and therefore plays a major role in the regulation of sterol homeostasis. For the reason that ACAT of animals as well as ARE1 and ARE2 of yeast occur in the endoplasmic reticulum (ER) and furthermore most of the enzymes involved in the post-squalene biosynthesis pathway are associated with the membrane of the ER, we expected to localize AtSAT to this cell organelle. To confirm this hypothesis we performed subcellular localization studies in Nicotiana tabacum leaves with fluorescence microscopy analyses. Agrobacterium tumefaciens cultures transformed with pEarlyGate 101(AtSAT-C-YFP-HA) or pEarlyGate 104(AtSAT-N-YFP) vector were infiltarted, which led to the expression of AtSAT proteins fused to the yellow flourescent protein YFP, either at the C-terminus or at the N-terminus. In this study we demonstrated that sterol O-acyltransferase from Arabidopsis thaliana is localized to the ER like most of the phytosterol biosynthesis enyzmes and ACAT of animals and ARE of yeast are. For that reason we provided further proof that AtSAT from Arabidopsis thaliana is indeed related to the membrane bound acyl-CoA:sterol acyltransferases (ACAT, ARE) of mammals and yeast.