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Title
Lysophosphatidic acid mediated signal transduction in murine microglia / submitted by Benjuamin Zucol, BSc
AuthorZucol, Benjamin
PublishedGraz, 2016
Description73 Blätter : Illustrationen, Diagramme
Institutional NoteKarl-Franzens-Universität Graz, Masterarbeit, 2016
Annotation
Zusammenfassungen in Deutsch und Englisch
LanguageEnglish
Document typeMaster Thesis
Keywords (GND)Zentralnervensystem / Makrophage
URNurn:nbn:at:at-ubg:1-104149 Persistent Identifier (URN)
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Lysophosphatidic acid mediated signal transduction in murine microglia [9.41 mb]
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Abstract (German)

Microglia sind die im zentralen Nervensystem ansässigen Makrophagen und vonentscheidender Bedeutung in neuroinflammatorischen Prozessen, die in einer Reihe vonNeuropathologien von Interesse sind. Wie alle Makrophagen sind sie in der Lage inAbhängigkeit von Stresssignalen ihren Phänotyp zu wechseln. Sie polarisieren entweder zueinem M1-ähnlichen, inflammatorischen Phänotyp, oder einem M2-ähnlichen Phänotyp derbei der Gewebereperatur bedeutsam ist. 1-Oleoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphat (LPA)bewirkt M1-ähnliche Aktivierung von murinen BV2 Mikroglia. Um die involviertenSignalwege dieses Prozesses besser zu verstehen wurden eine Reihe von Kinasen (JNK, PKD,p28, ERK, AKT) pharmakologisch inhbitiert, und Unterschiede in der Expressionverschiedener Proteine die an der M1/M2-Vermittlung beteiligt sind (NF-kB Familie, c-Jun,STAT1, STAT3) per Western Blot analysiert. Des weiteren wurden M1 und M2Markerenzyme (iNOS, COX-2, Arg-1, RELMa) mittels Fluoreszenzmikroskopie, und M1 undM2 antigenpositive Zellzahlen (CD40, CD86, CD206) mit Hilfe von FACS bestimmt.Außerdem wurden Chemokinlevel (IL-6, IL-1b, TNFa, CCL5, CXCL2, CXCL10) und dieProduktion von reaktiven Sauerstoff- und Stickstoffspezies gemessen. Schließlich wurde auchdie phagozyotische Aktivität der Zellen mit Hilfe eines FACS Experimentes ermittelt. Obwohles sich hier um eine Pilotstudie mit einer limitierten Anzahl an Experimenten handelt, konntenerste Anzeichen dafür gefunden werden, dass die Inhibierung von PKD sowie JNK in LPAstimuliertenBV2 Zellen zu einer Blockierung der M1-änlichen Aktivierung führt. DieResultate bezüglich AKT, ERK, und p38 waren weniger ausgeprägt und auf Western Blotsbeschränkt. Daher müssen in Zukunft die Experimente reproduziert und ausgeweitet werden.

Abstract (English)

Microglia are the resident macrophages of the central nervous system, and important playersin neuroinflammatory processes, which is of interest in a wide range of neuropathologies. Likeall macrophages they are able to switch their phenotypes depending on threat-indicatingstimuli. They can polarize towards an M1-like phenotype typically associated withinflammation and neuronal death, or towards an M2-like phenotype implicated in tissue repairand remodeling. 1-Oleoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphate (LPA) causes M1-likepolarization in the murine BV2 microglia cell line. To better understand the signaling pathwaysinvolved therein, a number of kinases (JNK, PKD, p38, ERK, AKT) involved in these cascadeswere pharmacologically blocked. Consequences of that were pursued via quantification of anumber of proteins (and their phosphorylation) involved in the signaling of M1 and M2phenotype switching (NF-kB family members, c-Jun, STAT1, STAT3) via western blotanalysis. M1 and M2 marker enzyme levels (iNOS, COX-2, Arg-1, RELMa) and surfaceantigen positive cell numbers (CD40, CD86, CD206) were determined by confocal imagingand FACS analysis, respectively. On top of that chemokine levels (IL-6, IL-1b, TNFa, CCL5,CXCL2, CXCL10) were measured and the production of reactive oxygen and nitrogen species.Finally changes in phagocytotic activity were determined via FACS measurements. Eventhough a limited number of experiments were performed in this pilot study, first clues that PKDand JNK inhibition could lead to an inhibition of M1-like phenotypes induced via LPA in BV2cells were obtained. The results pertaining to AKT, ERK and p38 were less clear-cut, and areconfined to western blot analysis only. Replication and extension of experimental procedureshas to be undertaken.